Contenuto
- Differenza principale
- Southern Blotting vs. Western Blotting
- Tabella di comparazione
- Cos'è Southern Blotting?
- Cos'è Western Blotting?
- Differenze chiave
- Conclusione
Differenza principale
La principale differenza tra Southern Blotting e Western Blotting è che Southern Blotting è una tecnica che viene utilizzata per rilevare un frammento di DNA specifico in un dato campione mentre Western Blotting viene utilizzato per scoprire una specifica proteina in un determinato campione.
Southern Blotting vs. Western Blotting
Il blotting è una tecnica utilizzata dagli scienziati per separare diversi tipi di molecole da una miscela o campione. In questa tecnica, le macromolecole come gli acidi nucleici (DNA e RNA) e le proteine in una miscela si muovono attraverso una lastra di gel. Qui, le particelle minute si muoveranno più velocemente di quelle più grandi. Queste molecole vengono premute contro la superficie di una membrana immobilizzata che trasferisce le molecole sulla membrana. Esistono diversi tipi di assorbimento in base al rilevamento di materiale specifico, ad esempio assorbimento meridionale, assorbimento settentrionale e assorbimento occidentale. Il Southern blotting è il tipo di blotting utilizzato per rilevare il DNA mentre il western blotting viene utilizzato per scoprire le proteine. Southern blotting è stato sviluppato da Edward M. Southern nel 1975. Quindi, è noto come Southern blotting. D'altra parte, il western blotting è stato sviluppato dal gruppo di George Stark alla Stanford University nel 1979. Questo nome è stato usato per abbinarsi con il Southern Blotting. La Southern blotting viene utilizzata per scoprire una specifica sequenza di DNA, mentre la western blotting viene utilizzata per scoprire una specifica sequenza di aminoacidi o proteine.
Tabella di comparazione
| Southern Blotting | Western Blotting |
| Una tecnica che viene utilizzata per scoprire una specifica sequenza di DNA in una data miscela è nota come Southern Blotting. | Una tecnica che viene utilizzata per scoprire una specifica sequenza di aminoacidi della proteina in una data miscela è conosciuta come Southern Blotting. |
| Sviluppato da | |
| Southern blotting è stato sviluppato da Edward M. Southern nel 1975. | Il western blotting è stato sviluppato dal gruppo di George Stark alla Stanford University nel 1979. |
| Tipo di rilevamento | |
| La Southern blotting viene utilizzata per scoprire una specifica sequenza di DNA. | La Western Blotting viene utilizzata per scoprire una specifica sequenza di aminoacidi o proteine. |
| Principio | |
| Funziona sul principio di ibridazione. | Funziona sul principio del metodo di immunodetection o dell'interazione antigene-anticorpo. |
| Sonda | |
| Un DNA a singolo filamento o talvolta RNA viene utilizzato come sonda. | Gli anticorpi primari e secondari sono usati come sonda. |
| Elettroforesi su gel | |
| L'elettroforesi su gel di agarosio viene utilizzata nella macchia meridionale. | SDS PAGE / Gel di poliacrilammide usato per separare le proteine nella macchia occidentale |
| Procedura di assorbimento | |
| La macchia meridionale segue la procedura di trasferimento capillare. | Western Blotting segue la procedura di trasferimento elettrico. |
| Campione | |
| Durante il blotting meridionale, il campione deve essere denaturato. | Durante il western blot, il campione dovrebbe trovarsi nel suo stato nativo. |
| Blocco | |
| Nessun passo come il blocco è coinvolto nella macchia meridionale. | Durante la western blotting, i siti di anticorpi non specifici vengono bloccati sulla carta nitrocellulosica con l'aiuto di latte in polvere o albumina sierica bovina (BSA). |
| Metodi di etichettatura | |
| Metodi comuni di etichettatura utilizzati nella macchia meridionale sono l'uso di coloranti cromogeni o radiomarcatura o etichette fluorescenti ecc. | I metodi di etichettatura utilizzati nella western blotting sono l'uso di anticorpi marcati in modo fluorescente o radiomarcatura, coloranti cromogenici o formazione di diaminobenzidina, ecc. |
| Metodi di rilevamento | |
| Il rilevamento della luce, l'Autoradiografo e le variazioni di colore sono utilizzati come metodi di rilevamento nella macchia meridionale. | I metodi di rilevamento nella macchia occidentale sono i cambiamenti di colore e il rilevamento della luce, ecc. |
| Applicazione | |
| La Southern blotting viene utilizzata nel rilevamento del DNA, nei test di paternità, nella diteggiatura del DNA, nell'identificazione delle vittime, nell'identificazione dei criminali, nella ricerca di agenti infettivi e nell'identificazione di mutazione o riarrangiamento genico, ecc. | La western blotting viene utilizzata per trovare il numero di proteine in una miscela, per rilevare la presenza di HIV, virus e batteri, ecc. Nel siero, per scoprire proteine difettose e utilizzata come misura definitiva per herpes, epatite B, Lyme malattia e malattia di Creutzfeldt-Jacob, ecc. |
Cos'è Southern Blotting?
Il Southern Blotting è il più antico metodo di blotting che fu dato da Edwin Southern, così chiamato Southern Blotting. È usato per scoprire una specifica sequenza di DNA in un dato campione o miscela. I passaggi che coinvolgono durante il blotting meridionale sono l'elettroforesi, il trasferimento e il rilevamento di sequenze specifiche. Prima di tutto, il DNA viene frammentato con l'aiuto di un enzima di restrizione specifico. Quindi i frammenti di DNA desiderati vengono separati mediante elettroforesi su gel. Questi frammenti vengono denaturati con l'aiuto di una soluzione alcalina, ad esempio NaOH, ecc. Per separare i due filamenti di DNA. Questi frammenti di DNA a singolo filamento poi trasferiti su una membrana attraverso il processo di assorbimento. Questo DNA legato alla membrana viene quindi trattato con una sonda marcata. Questa sonda si attaccherà al suo filo complementare sul DNA della membrana che può essere visualizzato mediante autoradiogramma ecc.
Cos'è Western Blotting?
Il metodo Western blotting è stato inventato dal gruppo di George Stark alla Stanford University che viene utilizzato per identificare una specifica sequenza di aminoacidi nella proteina. È anche noto come macchia di proteine o immunotopia. I passaggi durante il western blotting sono l'elettroforesi, il trasferimento e il rilevamento di proteine specifiche. Prima di tutto, omogeneizza la miscela. Quindi separare la molecola di interesse con l'aiuto dell'elettroforesi. Trasferisci queste molecole sulla membrana e identifica la proteina specifica usando una sonda specifica.
Differenze chiave
- Una tecnica che viene utilizzata per scoprire una specifica sequenza di DNA in una determinata miscela è nota come Southern blotting, mentre una tecnica che viene utilizzata per scoprire una specifica sequenza di aminoacidi della proteina in una determinata miscela è nota come Southern blotting.
- Southern blotting è stato sviluppato da Edward M. Southern nel 1975, quindi noto come Southern Blotting. D'altra parte, il western blotting è stato sviluppato dal gruppo di George Stark alla Stanford University nel 1979.
- La Southern blotting viene utilizzata per scoprire una specifica sequenza di DNA. Al contrario, il western blotting viene utilizzato per scoprire una specifica sequenza di aminoacidi o proteine.
- Il Southern blotting funziona secondo il principio di ibridazione sul rovescio della medaglia; Western Blotting funziona secondo il principio del metodo di immunodetection o dell'interazione antigene-anticorpo.
- Un DNA a singolo filamento o talvolta RNA viene utilizzato come sonda nella macchia meridionale sull'altro lato, mentre nella sonda occidentale vengono utilizzati anticorpi primari e secondari come sonda.
- L'elettroforesi su gel di agarosio viene utilizzata nella macchia meridionale mentre il gel SDS PAGE / poliacrilammide viene utilizzato per separare le proteine nella macchia occidentale.
- D'altra parte, la Southern blotting segue la procedura di trasferimento capillare; western blotting segue la procedura di trasferimento elettrico.
- Durante il blotting meridionale, il campione deve essere denaturato, mentre, durante il blotting occidentale, il campione dovrebbe trovarsi nel suo stato nativo.
- Nessun passo come il blocco è coinvolto nella macchia meridionale sul rovescio, durante la macchia occidentale, i siti di anticorpi non specifici sono bloccati sulla carta nitrocellulosica con l'aiuto di latte in polvere o albumina sierica bovina (BSA).
- I metodi di etichettatura più comuni utilizzati nella macchia meridionale sono l'uso di coloranti cromogeni o la marcatura con radiomarcatura o l'etichettatura fluorescente ecc.
- Il rilevamento della luce, l'Autoradiografo e le variazioni di colore sono utilizzati come metodi di rilevazione nella macchia meridionale, mentre i metodi di rilevazione nella macchia occidentale sono variazioni di colore e rilevazione della luce, ecc.
- La Southern blotting viene utilizzata nel rilevamento del DNA, nel test di paternità, nella diteggiatura del DNA, nell'identificazione delle vittime, nell'identificazione dei criminali, nella ricerca di agenti infettivi e nell'identificazione di mutazione o riarrangiamento genico, ecc. Al contrario, la western blotting viene utilizzata per trovare il numero di proteine in un miscela, per rilevare la presenza di HIV, virus e batteri, ecc. nel siero, per scoprire proteine difettose e usato come misura definita per herpes, epatite B, malattia di Lyme e malattia di Creutzfeldt-Jacob, ecc.
Conclusione
La discussione sopra riassume che la Southern blotting è la più antica tecnica di blotting utilizzata per scoprire specifici segmenti di DNA in un campione, mentre la western blotting è stata scoperta e utilizzata per identificare una specifica sequenza di aminoacidi o una specifica proteina.
